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文和杯全国作文锦标赛征稿通知 一、大赛目的 “文和杯”全国作文锦标赛是国内学生竞赛活动中权威的作文活动之一,目前已经成功举办了多届。该项赛事一年一届,参赛学生已逾千万,产生了广泛而深远的社会影响,并得到了国内众多高水平大学的关注。该比赛是由中国青少年研究会,与文和杯全国作文锦标赛组委会决定联合举办,2019年已经开始征集比赛稿件,欢迎广大学生朋友踊跃参赛。 二...>>更多

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谈HPLC 法测定治伤消瘀丸中士的宁和马钱子碱的含量
信息来源:文和杯全国作文锦标赛 发表时间: 2019/6/1 阅读数:22

治伤消瘀丸由马钱子(沙炒)、土鳖虫(炒)、乳香( 制)、自然铜( 煅、飞)、骨碎补( 去毛)、没药(制)、麻黄、香附(制)、红花、蒲黄、赤芍、桃仁等14 味中药组成,具有消瘀退肿功效, 用于骨骼与关节损伤和瘀肿疼痛, 适用于筋骨疼痛, 跌打损伤,瘀血痹症,筋断骨折。原标准收载于《卫生部药品标准(中药成方制剂第十册)》, 只有显微鉴别。方中马钱子具有通络止痛, 散结消肿的功效,为方中主药,且有大毒,必须加以控制。本研究参考有关文献,对方中主药马钱子中的士的宁和马钱子碱进行了含量测定的研究, 建立了测定方法,为控制该产品的质量提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260 高效液相色谱仪,配有四元梯度泵和Agilent chenstation 数据工作站(DEABJ00471);Sartorius CPA 225D 分析天平(26190055)。士的宁对照品(批号:110705-200306)、马钱子碱对照品( 批号:110706-200510)均购自原中国药品生物制品检定所。治伤消瘀丸(规格:32 粒重5 g,批号:20120901、20120902、20120903) 及阴性对照品均由河南华峰制药有限公司提供; 甲醇为色谱纯,水为娃哈哈纯净水,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm);以甲醇-0.01 mol/L 磷酸氢二钾溶液(27∶73)(用10%磷酸调节pH 至2.5)作为流动相;流速为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为260 mm。理论塔板数大于2 000,在此条件下,士的宁和马钱子碱与相邻组分均能达到完全分离。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取士的宁对照品16.22 mg 和马钱子碱对照品13.84 mg 至50 mL 量瓶中,溶解并加甲醇至刻度,作为对照品储备液。再精密量取上述储备液5 mL 至25 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,制成浓度分别为0.064 88,0.055 36 mg/mL 的混合溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10 g,研细,取约3 g,精密称定, 置具塞三角瓶中,加氢氧化钠试液2 mL 润湿后,精密加三氯甲烷50 mL,密塞,称定重量,振摇30 min,浸泡24 h,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过。精密吸取续滤液25 mL,置分液漏斗中, 用0.5 mol/L 的硫酸溶液提取3 次, 每次15 mL,合并酸液,滤过,滤液置50 mL 量瓶中,用少量0.5 mol/L 的硫酸溶液洗涤滤器,洗液与滤液合并,用0.5 mol/L 的硫酸溶液稀释至刻度,摇匀,即得。另取不含马钱子药材的阴性对照品,按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
2.4 测定方法
分别吸取对照品溶液、样品溶液和阴性对照品溶液各10 μL, 注入高效液相色谱仪, 测定, 记录色谱图,以外标法分别计算士的宁和马钱子碱的含量。
2.5 阴性对照品的测定
取不含马钱子药材的阴性样品, 按2.3 项下方法操作,得阴性对照溶液。依法测定,结果表明阴性液无干扰。
2.6 方法学考察
2.6.1 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液各2,4,8,12,16,20 μL,按上述色谱条件进行测定,以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标分别进行作线性回归。结果士的宁、马钱子碱回归方程分别为:Y = 2 741X + 13.72(r = 0.999 3,n = 6 ),Y = 2 497X + 13.38(r = 0.999 1,n = 6)。表明士的宁在0.129 8 ~ 1.297 6 μg,马钱子碱在0.110 7 ~ 1.107 2 μg 范围内线性关系良好。
2.6.2 精密度试验精密吸供试品溶液的10 μL,重复进样6 次,分别记录士的宁和马钱子碱峰面积。结果士的宁和马钱子碱峰面积的RSD 分别为0.76%,0.95%(n = 6),表明仪器精密度良好。
2.6.3 稳定性试验将供试品溶液分别在制备后0,1,2,4,8,12 h 时进样测定。结果士的宁和马钱子碱峰面积的RSD 分别为1.55% ,1.80% (n =6),表明12 h 内样测定,样品稳定性良好。
2.6.4 重复性试验精密称取取同批号的样品(批号:111023),按供试品溶液的制备方法制备6 份样品溶液,依法测定。分别计算含量和RSD,结果士的宁平均含量为1.437 mg/g,RSD 为0.89%(n = 6)。马钱子碱的含量为1.172 mg/g,RSD 为1.39%(n = 6)。
2.6.5 加样回收率试验采用加样回收法,精密称取样品6 份, 每份约3 g 分别加入对照品储备液6 mL,照供试品溶液制备方法制备供试液, 依法测定。
2.7 样品含量测定
取样品(批号:111023, 111215,120307)按2.2处理,按实验中所建立的方法进行测定,结果每克含士的宁分别为1.44,1.37,1.42 mg,马钱子碱分别含1.17,1.05,1.12 mg。
3 讨论
3.1 《中国药典》(2010 年版) 一部规定, 马钱子药材中士的宁的含量为1.20% ~ 2.20%,马钱子碱的含量不得少于0.80%, 查阅有关文献并根据本公司的马钱子药材检验情况,在设计对照品浓度线性范围时,浓度选择相对较低。在数据处理时, 对于样品处理过程中加入的2 mL 氢氧化钠润湿试液,是否参与计算未找到相关文献,2 mL试液未定量加入,且基本被药材粉末吸收, 综合考虑,未参与计算。
3 . 2 按药典马钱子的测定方法的流动相, 乙腈-0.01 mol/L 庚烷磺酸钠与0.02 moI/L 磷酸二氢钾等量混合溶液( 用10%磷酸调节pH 值2 . 8 )(21∶79)和0.01 mol/L 磷酸氢二钾溶液-甲醇(73∶27)(用10%磷酸调节至pH 至2.5)进行比较,结果士的宁和马钱子碱的出峰顺序正好相反; 同为酸性缓冲盐, 一个加乙腈, 一个加甲醇为什么出峰顺序相反,有待进一步研究。当检测波长为254 nm,士的宁的峰高远大于马钱子碱,而在260 nm 下检测, 两者峰面积大小差别不大。综合考虑, 甲醇-0.01 mol/L 磷酸氢二钾溶液(27∶73) ( 用10%磷酸调节pH 至2.5)为流动相,波长选择260 nm。
3.3 不同品牌色谱柱及填料比较Kromasil C18柱、Welchrom C18柱、Thermo ELECTRON CORPORATIONODS-3 填料柱和依利特Sinochrom ODS-BP填料色谱柱,除了保留时间不同外,含量测定结果无明显差异。
3.4 本实验以士的宁和马钱子碱为指标,建立含量测定方法,经过方法验证,表明该方法重复性好,精密度高,稳定性好,回收率符合要求,可以用于本产品的质量控制。
 

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